眼科临床分离菌的生物膜形成能力检测

目的从表型、基因、形态学三方面了解眼科表皮葡萄球菌临床分离株体外细菌生物膜（BBF）的形成能力，从而为临床诊断BBF相关感染提供依据。
方法 1.收集2010年1月~12月北京同仁医院眼科临床送检的51株表皮菌。ATCC12228为阴性对照，ATCC35984为阳性对照。表型检测：使用刚果红琼脂(CRA)平板法定性及结晶紫微孔板法半定量检测。2. 成膜基因检测：对BBF相关基因icaA进行PCR扩增，并分析成膜基因与BBF表型的相关性。3. 形态学观察：建立体外BBF培养模型；在培养的第1、3、7天取出BBF载体分别进行结晶紫染色和硝酸银染色，光镜及扫描电镜（SEM）观察其形态。
结果 1.表型及基因检测：CRA平板法培养24h后菌落为黑色则为BBF阳性株，菌落为红色则为BBF阴性株；结晶紫微孔板法A570>0.12为BBF阳性株，A570>0.24为生物膜阴性株；CRA实验阳性率26.4%，结晶紫实验阳性率17.0%, icaA基因阳性率41.5%, 3种检测方法均阳性17.0%。icaA基因与CRA实验结果的一致率为73.6% , icaA基因与结晶紫实验结果的一致率为75.5%，结晶紫实验与CRA实验结果的一致率为90.6 % 。3种检测方法间具有统计学相关性(P<0.05)。2.形态学观察：光镜可见生长过程中BBF的形态分布，SEM可见典型立体结构。1d:菌体散在粘附于载体，SEM显示菌体周围可见粘性物质形成的包膜将其包裹在内；3d:菌体聚集形成簇状、“堤坝”样微菌落团，SEM可见菌体间以丝状物相连; 7d:菌体形成的巨大微菌落团密集成“地毯”样，SEM可见菌落间及菌落内的水通道。BBF阴性菌株未见微菌落形成。
结论 1.眼科临床株有一定的成膜能力，基因检测与表型检测间有统计学相关性。2. 表型检测操作简便快捷，可推荐作为实验室常规筛检成膜能力的方法。3.SEM可以很好地展现BBF的立体结构。