目的 磷酸化是晶状体老化过程中发生的一种重要的蛋白质翻译后修饰,它参与了细胞的增殖、发育、分化、凋亡及细胞骨架调控等生理过程。本研究拟用磷酸化蛋白质组学方法对人眼年龄相关性白内障及透明晶状体进行研究,寻找特定的磷酸化蛋白及磷酸化位点,以期为揭示磷酸化修饰在年龄相关性白内障发病过程中的作用提供初步的线索。
方法 白内障囊外摘除术中收集年龄相关性白内障晶状体核及眼库收集年轻透明晶状体核各一枚,脲素提取晶状体蛋白,胰蛋白酶酶解提取的蛋白得到肽段溶液,利用TiO2磁性纳米微球富集磷酸化肽段,液相色谱串联质谱鉴定洗脱所得的磷酸化肽段,通过数据库检索得到年龄相关性白内障及透明晶状体的磷酸化蛋白及磷酸化位点信息进行比较分析。
结果 在白内障晶状体核内发现96种磷酸化晶状体蛋白中312个磷酸化位点,其中丝氨酸占55.1%,苏氨酸占35.3%,酪氨酸占9.6%;在年轻透明晶状体核内发现170种磷酸化蛋白中495个磷酸化位点,其中丝氨酸占59.6%,苏氨酸占29.1%,酪氨酸占11.3%。比较两组的α-,β-及γ-晶状体蛋白发现,白内障组有αA, αB, βA1,βB1及γS磷酸化蛋白中的22种磷酸化肽段,透明晶状体组有αA, αB, βA1,βB1,βB2,γS,γB,γC磷酸化蛋白中的40种磷酸化肽段,其中有一部分磷酸化位点是首次被报道。
结论 磁性纳米微球富集的磷酸化蛋白组方法能有效鉴定人眼晶状体的磷酸化蛋白及磷酸化位点,通过白内障及透明晶状体的差异磷酸化蛋白组比较,有望揭示年龄相关性白内障疾病相关的特定磷酸化蛋白及磷酸化位点,为该病的发病机制研究提供一定的线索。 |