目的 检测HSV-1感染的人角膜上皮细胞(HCE)中HSV-1 miR-H6的表达变化,观察HSV-1 miR-H6在HSV-1裂解感染中的作用。
方法 以感染复数(multiplicity of infection, MOI)为5、1、0.1的HSV-1 ( F株)感染体外培养HCE,在HSV-1感染后24h时Real time PCR检测miR-H6。以MOI为1的HSV-1感染体外培养HCE细胞,在HSV-1感染后12、24、48 h时Real time PCR检测miR-H6。在HSV-1感染后12h,数字表达谱基因测序测定病毒基因的变化。将miR-H6 mimics转染至HCE细胞再感染HSV-1,Western blot检测HCE细胞中ICP4蛋白的表达;空斑试验观察miR-H6对HSV-1复制的影响;双向电泳检测培养液中外分泌蛋白的表达。
结果 Real time PCR发现在HSV-1感染的HCE和RPE细胞中miR-H6的表达量随病毒初始感染量增加而增加,随病毒感染时间增加而增加。数字表达谱基因测序结果提示与正常HCE细胞相比,感染了HSV-1的HCE细胞中有57个病毒基因上调。将miR-H6 mimics转染至HCE细胞再接种病毒,空斑试验检测到miR-H6可明显减少HSV-1形成的空斑面积(p<0.05),Western blot检测到miR-H6可降低ICP4蛋白的表达(p<0.05)。双向电泳发现与正常HCE细胞相比,感染了HSV-1的细胞培养液中外分泌蛋白明显减少,但也存在特征性的高丰度蛋白,转染了miR-H6 mimics再感染HSV-1的培养液中这些高丰度蛋白的表达被抑制。
结论 miR-H6与HSV-1感染的HCE和RPE细胞中病毒量呈正相关;与正常细胞相比,感染了HSV-1的HCE细胞中有57个病毒基因上调;miR-H6可以降低HSV-1感染的HCE细胞中ICP4蛋白的表达,抑制病毒复制; HSV-1 miR-H6可以影响HCE细胞培养液中外分泌蛋白的表达。 |