pSUPER/CD147siRNA在高糖诱导RPE细胞血管生成调节因子表达中的作用及机制研究

目的探讨pSUPER/CD147siRNA在高糖诱导RPE细胞血管生成调节因子VEGF、MMP-2、MMP-9、PEDF表达变化中的作用及可能参与的相关信号通路。
方法利用siRNA干扰技术下调人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞CD147的表达，以ARPE-19-CD147siRNA稳定转染ARPE-19细胞为实验组，稳定转染mock–siRNA的ARPE-19细胞为对照组进行实验。1.Western Blot法检测高糖诱导下两组细胞血管生成调节因子VEGF、MMP-2、MMP-9、PEDF的表达水平差异；2.Western Blot法检测高糖刺激下两组细胞PI3K/Akt和MAPK信号通路相关分子磷酸化水平的差异；3.分别加入PI3K/Akt抑制剂LY294002和p-38/MAPK抑制剂SB203580后，进一步检测在高糖刺激下实验组及对照组ARPE-19细胞的VEGF、MMP-2、MMP-9、PEDF的表达变化。
结果 1.Western Blot检测结果表明：高糖培养可诱导对照组ARPE-19细胞VEGF、MMP-2、MMP-9的表达水平上调，PEDF表达水平下调，而实验组细胞VEGF、MMP-2、MMP-9的表达上调及PEDF的表达下调不明显；2.对照组ARPE-19细胞在高糖刺激15、30、60和120min后，能促进Akt，p-38，ERK1/2，JNK1/2和MEK的磷酸化水平，而实验组细胞，高糖诱导下Akt、p-38、ERK1/2、JNK1/2和MEK的磷酸化水平被显著抑制；3.未加或加入LY294002、SB203580及LY294002+SB203580各组相比，LY294002+SB203580对高糖诱导下对照组细胞VEGF、MMP-2、MMP-9的表达上调及PEDF表达上调的抑制效果最明显；实验组加或不加入LY294002和/或SB203580后，其VEGF、MMP-2、MMP-9、PEDF表达水平无明显变化。
结论 1.在PI3K/Akt和MAPK信号通路介导下，高糖能诱导ARPE-19细胞VEGF、MMP-2、MMP-9表达上调和PEDF表达下调；2.CD147siRNA能抑制PI3K/Akt和MAPK信号通路的活化，进而抑制高糖对ARPE-19细胞VEGF、MMP-2、MMP-9表达上调和PEDF表达下调的作用。