目的 感染性角膜炎是一种严重的致盲眼病,其致病微生物主要为为细菌、真菌、和病毒。病原菌粘附于宿主细胞是感染性角膜炎发生的首要步骤,因此揭示病原菌粘附的分子机制,特别是确定其中的关键因子,对于寻找新的诊断和治疗靶点有重要意义。
方法 利用人角膜上皮细胞对噬菌体展示的随机12肽文库进行三轮生物亲和淘筛,对所得的克隆进行测序,并通过同源性分析对它们进一步鉴定。将筛选的感兴趣的短肽作为竞争性抑制剂,通过感染性角膜炎常见病原菌烟曲霉和绿脓杆菌的细胞侵袭模型,筛选能够抑制病原菌粘附宿主细胞的多肽。
结果 挑取35个淘筛后的噬菌体克隆进行测序,发现代表了14条不同的12肽。通过同源性分析发现,这14条肽段大多都与一些病原微生物的某种蛋白有很高的同源性。针对多肽所对应的同源蛋白的功能,挑选其中10条感兴趣的多肽进行人工合成,并用ELISA方法验证了10条多肽可结合于人角膜上皮细胞,与基质细胞也有不同程度的结合。通过竞争性抑制病原菌黏附的实验发现,这10条多肽对于抑制绿脓杆菌的黏附效果较明显,特别是Pc-C,Pc-D和Pc-F;对抑制烟曲霉菌黏附于细胞也有一定的效果,较明显的是Pc-C和Pc-F,并且抑制效果表现出一定的剂量依赖性。
结论 本研究通过噬菌体展示技术发现了14条可以和人角膜上皮细胞特异结合的12肽,并对它们的序列进行了分析,同时验证了其中2条多肽在感染性角膜炎常见致病菌黏附宿主细胞时存在一定的抑制作用。 |