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角膜上皮干/祖细胞分化过程中胞内氧化应激水平的变化           ★★★
角膜上皮干/祖细胞分化过程中胞内氧化应激水平的变化
作者:周庆军 文章来源:山东省眼科研究所 点击数:300 更新时间:2011/9/13

目的 检测角膜上皮干/祖细胞的分化过程中细胞内的氧化应激水平变化。
方法 体外培养角膜上皮干/祖细胞TKE2细胞,分别用正常KSFM TKE2培养液,添加0.9mM Ca2+的KSFM培养液及含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液培养细胞3天后,观察并照相记录细胞的生长形态;流式细胞技术及免疫细胞荧光技术检测各组TKE2细胞干细胞标记分子p63、ABCG2的表达情况;采用DCFH-DA标记细胞内的活性氧,分别用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计检测不同培养条件下细胞内的氧化应激水平变化。
结果 正常KSFM培养液培养的对照组TKE2细胞体积小,核质比大,细胞呈鹅卵石样形态;细胞表达干细胞标记分子P63、ABCG2,细胞内的活性氧水平较低。采用添加0.9mM Ca2+的KSFM培养液培养的TKE2细胞体积较对照组有所增大,细胞较为伸展;细胞内干细胞标记分子p63、ABCG2的表达变弱;而细胞内的活性氧水平明显升高。采用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液培养的TKE2细胞体积显著变大,核质比小,细胞扁平伸展;细胞几乎不表达干细胞标记分子p63、ABCG2;而细胞内的活性氧水平增高更为明显。
结论 角膜上皮干/祖细胞的分化过程中,伴随着细胞内的氧化应激水平的升高。

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