目的 角膜缘干细胞缺乏是角膜缘干细胞群缺失或功能障碍,导致严重的眼表异常。角膜缘干细胞移植是目前有效治疗LSCD的一种方式,但具有一定的局限性。自体成体干细胞(adult stem cells, ASCs)眼表移植避免了移植排斥反应,而且取材广泛,逐渐成为研究的重点。本实验旨在探讨人表皮源性间充质干细胞样多能细胞(Human Epidermis-derived Mesenchymal Stem Cell-like Pluripotent Cells, hEMSCPCs)向角膜上皮分化的可能性及合适的分化条件,为治疗眼表疾病提供新的理论基础和新的细胞来源。
方法 1.成脂诱导条件培养基和成骨诱导条件培养基分别诱导hEMSCPCs成脂肪细胞和成骨细胞分化。2.采取三种方式诱导hEMSCPCs向角膜上皮细胞分化,A组采取去上皮羊膜作为滋养层,角膜上皮培养基作为诱导培养基;B组采用Transwell板进行人角膜上皮细胞系(SDHCEC1)和hEMSCPCs两种细胞共培养,角膜上皮培养基作为诱导培养基;C组用培养过人原代角膜缘上皮细胞的epilife培养基作为诱导培养基。3.分别在第1、2、3天倒置显微镜下观察各组hEMSCPCs细胞形态变化;采取免疫荧光、流式细胞仪来检测各组CK3,P63蛋白表达的变化,Real-Time PCR检测各组CK3,P63基因表达的变化。
结果 1. 在成脂诱导条件培养基和成骨诱导条件培养基诱导下,hEMSCPCs胞浆内分别出现脂滴和钙沉积。2. 诱导hEMSCPCs向角膜上皮分化后,免疫荧光和流式细胞仪检测各组均有角膜上皮特异蛋白CK3的表达,各处理之间CK3表达差异有统计学意义,A组(31.37±4.77%)>C组(21.97±2.96%)>B组(8.17±3.07%)>对照组(0.10±0.04%),P<0.001。P63表达未增加。Real-Time PCR检测各组诱导后CK3基因表达各组之间及与对照组之间表达差异有统计学意义,P<0.001。
结论 1.hEMSCPCs具有具有可以分化为成骨细胞和成脂肪细胞的能力。2.hEMSCPCs具有向角膜上皮细胞分化的潜能。3.去上皮羊膜为hEMSCPCs向角膜上皮细胞分化提供了较合适的微环境。 |