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G-CSF对纯化培养大鼠视网膜神经节细胞突起生成以及在缺氧下GAP-43、MAP-2表达的影响           ★★★
G-CSF对纯化培养大鼠视网膜神经节细胞突起生成以及在缺氧下GAP-43、MAP-2表达的影响
作者:吴雅臻 文章来源:吉林大学第二临床医院 眼科 点击数:263 更新时间:2011/9/13
目的 本实验主要研究粒细胞集落刺激因子(Granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)G-CSF是否可以促进视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)突起的生成,以及对损伤后RGCs轴突再生能力的影响,并探讨其可能的作用机制。
方法 构建纯化培养大鼠RGCs体外模型,(1)DMEM培养液进行培养,分离纯化出神经节细胞,免疫组化鉴定。(2)形态学以及免疫组织化学染色法观察G-CSF对RGCs树突生成的影响。(3)在Cocl2诱导的缺氧情况下,rt-PCR检测G-CSF对RGCs 生长相关蛋白-43(GAP-43)、微管相关蛋白(MAP-2)mRNA的表达的影响。
结果 1.荧光显微镜下RGCs Thy1.1单克隆抗体染色阳性,胞体和突起均呈绿色荧光。相差显微镜下培养24h的RGCs,胞体呈圆型或椭圆型,有短小突起。2.不同培养时间G-CSF组和对照组有突起的细胞数比较,可见3天时G-CSF组突起细胞数多于对照组(**p<0.01 vs 对照组,* p<0.05 vs对照组)(± S)。3. 缺氧组和G-CSF组GAP-43mRNA表达增高(*p<0.05,#p<0.01 vs 对照组);与缺氧组相比,G-CSF组中GAP-43mRNA表达更高(&p<0.05 vs 缺氧组)。4. 缺氧组和G-CSF组GAP-43mRNA表达增高(*p<0.05 vs 对照组);6h和12h时,G-CSF组中GAP-43mRNA表达更高(&p<0.05 vs 缺氧组)。
结论 本实验对RGCs的分离和培养是成功的,并且具有培养的细胞具有RGCs的特征和正常功能,能用于下一步实验研究。G-CSF促进RGCs突起生长并且上调GAP-43、MAP-2 mRNA的表达。


 

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