目的 探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)定向分化成光感受器细胞所需的微环境。
方法 采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离纯化BMSCs,培养第3代的细胞以碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及脑源性神经营养因子(BDNF)三种因子首先进行向神经前体细胞诱导分化,应用免疫细胞化学检测巢蛋白及微管相关蛋白-2,当巢蛋白阳性表达率达到最高时更换诱导因子,加入色素上皮衍生因子(PEDF)及牛磺酸(Taurine)继续诱导2~3w,用免疫细胞化学及RT-PCR法检测视紫红质的表达情况。
结果 诱导第3d开始能检测到巢蛋白表达,第12d阳性表达率达到最高,达(90.9±2.6)%。微管相关蛋白-2在诱导后第6d检测到阳性表达。部分细胞形态呈神经元细胞样。第12d诱导因子更换为PEDF及Taurine继续诱导2~3w,检测到有视紫红质表达,第2w阳性率为(20.7±3.8)%。第3w阳性率为(89.8±3.7)%。
结论 采用分阶段诱导法,应用因子FGF、EGF、BDNF及PEDF、Taurine能在体外诱导BMSCs表达光感受器细胞标志物视紫红质。
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