目的 探索感光细胞变性和视网膜新生血管之间的内在联系,并进一步研究视网膜新生血管发生和发育的机制。
方法 一周龄的昆明小鼠,rdf/km(昆明种来源的感光细胞变性小鼠),rdf/C57(将rdf/km的感光细胞变性基因同源导入C57小鼠),C57小鼠等四个品系各两窝小鼠与它们的代乳母鼠置于75±2%的氧舱中喂养5天,期间若有母鼠死亡,则开舱用备用母鼠代替哺乳。而后再在正常空气条件下喂养5天。在第17—21天期间随机选取各组的其中5只小鼠用改良的墨汁灌注方面进行心脏灌注,视网膜铺片。其余小鼠进行多聚甲醛心脏灌注,取视网膜标本分别进行石蜡切片和冰冻切片。石蜡切片进行H.E染色观察视网膜的结构和突破内界膜的内皮细胞的情况。冰冻切片分别用于对v-WF因子和VEGF(血管内皮细胞生长因子)的免疫组织化学染色。
结果 高氧暴露会使各组小鼠在视网膜铺片中出现不同程度的血管挛缩,扭曲和增生,部分铺片结果显示会有无灌注区和出血的发生。这种变化在正常小鼠的铺片上更多发生,也更严重,而视网膜感光细胞变性小鼠也会有不同程度的出现,尤其是昆明来源的rdf/km小鼠。H.E染色结果显示C57小鼠、rdf/km小鼠、rdf/C57和昆明小鼠突破内界膜的内皮细胞核数统计结果分别为45.74±2.14, 29.15±2.87, 16.95±3.12, 39.49±1.59。各高氧暴露组小鼠和其相应的正常组均有统计学差异(P<0.01)。感光细胞变性小鼠和其种属来源的正常眼底小鼠也有统计学差异。v-WF因子染色进一步证实了H.E染色的细胞核是血管内皮细胞核。VEGF免疫组化染色也显示VEGF因子的染色深浅与各组的血管增生情况呈正相关,且主要分布在外核层和神经节细胞层。
结论 我们的实验研究至少可以得出一下结论:氧诱导的视网膜新生血管的发生呈现种属差异性,似乎与不同毛色有一定关系。视网膜感光细胞变性小鼠同样可以在氧诱导条件下产生新生血管,而其发生程度低于正常眼底小鼠,似乎说明感光细胞变性还是对视网膜新生血管的发育有部分影响。此研究结果不同于早前报道,也是对从前报道认为视网膜感光细胞变性小鼠不发生视网膜新生血管的进一步验证和补充。这种血管的发生是与VEGF因子的产生呈正相关的,提示VEGF在视网膜感光细胞变性影响新生血管的发生过程中是一个很重要的因子。
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