目的 研究证明全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能够抑制人巩膜成纤维细胞( human scleral fibroblasts,HSFs)的增殖,并且六种视黄酸受体 (RARs:α,β,γ; RXRs:α,β,γ)在HSFs均有表达。本研究通过体外培养HSFs的方法,探讨ATRA对HSFs的三种RARs的调节作用。 方法 通过HSFs的原代培养和鉴定,利用RARs的激动剂ATRA处理HSFs,应用免疫荧光、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot等方法,分析三种RARs的mRNA水平及蛋白水平表达的变化。 结果 对于HSFs,RARβ的mRNA水平经过108M to 105M的ATRA处理24h后表达明显上调(P <0.01),呈剂量依赖性,在10-6M达到高峰(P <0.001),而RARα和RARγ的mRNA水平则没有变化;为了解ATRA引起RARβ发生变化的最早时间,应用10-6M ATRA处理HSFs,结果发现在处理4h时即可诱导出RARβ mRNA的上调(P <0.01)。通过共聚焦显微镜,可以观察到RARβ蛋白在核膜及核内均有表达,经10-6M ATRA处理24h后表达上调;Western blot结果也显示在经过106M的ATRA处理12h后RARβ蛋白水平开始上调,与对照组相比有统计学意义(P <0.05),并呈时间依赖性,72h时RARβ蛋白水平显著增加(P<0.001)。 结论 ATRA通过上调RARβ作用于体外培养的HSFs。 |