目的 视网膜色素上皮细胞的氧化损伤在年龄相关性黄斑变性(AMD)的发病中起到重要的作用。传统的抗氧化药物由于血视网膜屏障的限制难以在眼内达到有效浓度因而在临床试验中效果欠佳。本研究的目的在于探索慢病毒介导的Nrf2基因过表达在治疗视网膜色素上皮细胞氧化损伤中的有效性，为其进一步应用提供依据。
方法 由取自广东省眼库的新鲜尸体眼球材料中分离培养原代人视网膜色素上皮细胞（RPE）。通过显微镜照相和免疫荧光对所分离细胞进行形态学和免疫学鉴定。以HIV-1基因组为基础构建慢病毒载体，然后从培养的RPE细胞cDNA中扩增人Nrf2基因的编码区序列并将其插入慢病毒载体内。用磷酸钙法转染293T细胞进行病毒包装，并用制备的病毒液感染RPE细胞。对感染后细胞进行培养，约两周后通过逆转录定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹法检测目的基因在RPE细胞内的表达水平。用双氧水处理细胞，通过形态学观察、MTS检测和流式细胞术三种方法观察目的基因稳定过表达对细胞的存活力和凋亡情况的影响，并用qRT-PCR检测目标基因过表达对细胞内多种抗氧化基因表达的影响。
结果 原代人视网膜色素上皮细胞被成功分离并鉴定。慢病毒载体被成功构建并用于感染原代RPE细胞。感染后的RPE细胞内目的基因的稳定表达水平显著抬高约6到10倍。在经过多次传代的后，感染后细胞的在氧化环境下的存活力仍较对照组显著增强，细胞凋亡率也明显低于对照组。随着Nrf2基因的稳定过表达，RPE细胞内主要抗氧化基因大部分显著上调。
结论 慢病毒介导的Nrf2基因过表达能持续激活RPE细胞内的抗氧化基因表达，并有效地增强细胞在氧化环境下的存活力。感染本身未对细胞存活力产生明显影响。本研究为年龄相关性黄斑变性的治疗提供了新的研究方向。