目的 前房水是眼内重要的细胞外介质之一，目前已有不少关于各种眼内疾病人前房水中炎症因子组成和浓度的报道，然而文章中对于同种疾病的同一细胞因子的浓度报道有较大的差别。对于这种差别的存在，除了入组病人本身的差异外，各个研究组选用测量技术上的不同，以及样本保存方法的差异对所测量浓度的影响目前并不清楚。先前的经验告诉我们房水样本在长时间低温保存过程中其细胞因子的浓度会有很大的变化，在这里我们具体探讨低温保存对于房水中不同细胞因子浓度的影响，并探索如何改善房水保存的方法以避免上述变化。
方法 房水样本在抽取后24小时内4oC保存，在进入超低温冷藏前离心弃细胞，分别（1）直接冻存（2）加等体积无菌0.5%BSA，（3）加等体积0.1%BSA和蛋白酶抑制剂，然后-80oC冻存。用伯乐公司的BioPlex以及R&D的单因子ELISA在冻存后1周和15周后定量检测其中细胞因子浓度。
结果 对多对直接低温冻存的房水样本在冻存一周和三个月后用BioPlex液体芯片法测定IL-6，IL-8,IFN-g,MCP1,MIP1b,MIG,IP10的浓度，发现以上因子在大多数样本中出现浓度变化，其中IL-6(p=0.021)和IL-8 (p=0.003)浓度显著减低（Wilcoxon rank test），相反，在6对分别添加等体积0.5%BSA或等体积0.1%BSA加蛋白酶抑制剂保存的样本中，用传统ELISA方法在一周和三个月后检测其IP10和MIG浓度，发现只有1个样本在三个月的超低温保存后其浓度出现超过第一次检测20%的差异，但是IL-8浓度在第二次检测中仍然显著下降。同一样本在同一时间用液体芯片和传统ELISA单因子检测发现其浓度有显著区别。
结论 样本保存时间和检测手段影响细胞因子的定量，在课题设计中需要充分考虑这两个因素的一致性。添加低浓度BSA有利于稳定房水样本中的细胞因子，而蛋白酶抑制剂对于保存房水因子的作用仍有待于进一步认定。 |
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