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小鼠真菌性角膜炎的活体动态双光子影像研究           ★★★
小鼠真菌性角膜炎的活体动态双光子影像研究
作者:张红敏 文章来源:河南省眼科研究所 点击数:228 更新时间:2012/9/13
目的 本研究利用角膜组织不同细胞和组织的光学特性,采用双光子荧光成像技术和二次谐波成像技术,对真菌性角膜炎小鼠角膜进行了活体体内、非侵入、立体形态学观察,为深入了解真菌性角膜炎的病理变化打下基础。
方法 主要仪器有德国Zeiss公司的LSM 780 NLO双光子激光扫描显微镜,美国相干公司的飞秒脉冲激光器。显微镜设置为:物镜为共聚焦专用20X浸入式水镜(NA 1.0)、3个反射非扫描检测器(Non Descanned DetectionNDD)设置分别为:R1LP 555BP 565-610)、R2mirrorBP 380-430)、R3mirrorBP 500-550),飞秒激光波长为800nmC57BL/6N正常对照小鼠和真菌接种后24小鼠分别麻醉、固定后,暴露眼球,采用上述设置进行扫描,获取图像资料,利用Zeiss Zen 2010图像分析软件进行处理、分析。
结果 1)正常小鼠通过瞳孔,可以检测到角膜、房水和晶体组织,得到了这些部位的组织结构和细胞形态学的立体资料。2)可以清楚地检测到真菌、角膜上皮细胞、角膜基质细胞、角膜基质内的胶原结构,上皮下神经和血管影像。3)真菌周围,角膜固有细胞和胶原组织被破坏,胶原结构紊乱,炎症细胞包围,真菌周围组织呈现鞘样、隧道样结构;4)创伤部位有角膜上皮细胞填充的填充现象,真菌周围有角膜基质的激惹现象。
结论 通过对真菌性角膜炎小鼠角膜进行活体体内形态观察,可以清晰显示真菌性角膜炎病理状态下真菌、角膜固有细胞、胶原以及炎症细胞相互作用的立体图像,该方法是一种新的、活体体内、非创伤成像方法,对动态研究眼前节的病理以及病理变化提供了一些有意义的资料。
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