目的 探讨吡非尼酮(PFD)体外抑制人晶状体上皮细胞(HLECs)增殖、迁移和胶原分泌的作用和机制,为PFD应用于防治后发性白内障提供科学依据。 方法 传代培养永生化HLECS(SRA01/04),MTT法确定PFD的起始作用浓度、最适作用浓度以及最适作用时间;划痕法检测PFD作用下HLECs迁移能力的变化;台盼蓝法检测PFD对HLECs是否有细胞毒性;应用Realtime RT-PCR法、免疫荧光法、免疫印迹法、明胶酶谱法检测PFD作用后TGFβs及下游SMAD通路的基因和蛋白表达的变化以及HLECS细胞外基质和分泌MMPs的变化。 结果 ①PFD抑制HLECs增殖的起始作用浓度为0.25 mg/ml,最适作用浓度为0.5mg/ml,最适作用时间为24hr;②PFD显著抑制HLECs迁移能力且呈浓度依赖性;③PFD(0~1mg/ml)对HLECs无毒性作用;④Realtime RT-PCR检测PFD作用24hr后,TGFβ1、β2、β3及其下游因子SMAD3、4 mRNA表达均减少;⑤免疫印迹法提示PFD作用24hr后,TGFβ2、3蛋白、SMAD3、4、纤维连接蛋白等蛋白表达均受到抑制;⑥明胶酶谱法检测PFD作用后HLECs分泌MMP2和MMP9均减少。 结论 PFD对体外培养HLECs的增殖、迁移和胶原分泌有明显抑制作用且呈浓度依赖关系,与细胞毒性无关,其起始作用浓度和最适作用浓度分别为0.25 mg/ml和0.5mg/ml,最适作用时间为24hr。PFD抑制体外培养HLECs增殖的机制可能是:通过抑制HLECs中TGFβs基因和蛋白的表达,从而抑制TGFβs下游通路(SMADs通路);这些生长因子表达的减少可能是体外HLECs增殖和迁移能力受抑制的原因。 |