目的  阐明Pax6基因调控角膜上皮干细胞增殖与分化的分子机制，为角膜缘干细胞的体外扩增提供新的思路。

方法  构建过表达和敲低Pax6的慢病毒载体，分别侵染人原代克隆培养的角膜上皮干细胞。通过克隆形成率检测、免疫印迹、免疫荧光和RT-qPCR分析Pax6表达水平对角膜上皮干细胞增殖能力和细胞内△Np63α的表达的影响；在角膜上皮干细胞单独或共表达Pax6和△Np63α，通过MTT、qPCR、免疫荧光等手段，分析Pax6和△Np63α共同表达变化对角膜上皮干细胞增殖分化标记物Ki67、K12、K14和K15表达的影响；构建K12启动子-报告基因活性分析载体，通过Lucifersae活性检测分析Pax6和△Np63α表达变化对角膜特异性K12转录活性的影响。

结果  过表达Pax6后角膜上皮干细胞克隆形成率较对照组显著降低，而敲低Pax6对克隆形成率无显著影响；过表达Pax6可以下调△Np63α蛋白和mRNA水平，而敲低Pax6则可提高角膜上皮中△Np63α含量；组成性表达△Np63α可阻断Pax6过表达所引发的角膜上皮干细胞生长抑制，并且回复由Pax6过表达引起的Ki67、K14和K15的表达下调；在启动子-报告基因模型中，Pax6对K12转录的促进作用可被△Np63α所阻断。

结论  Pax6可通过下调△Np63α的表达来抑制角膜上皮干细胞增殖；Pax6的表达可促进角膜上皮干细胞的分化，而组成性表达△Np63α的可拮抗Pax6的促分化作用。