目的 研究离子型谷氨酸受体NMDA受体的调节性亚基3A和3B(NMDAR3A-NMDAR3B, NR3A-NR3B)蛋白在鲫鱼视网膜上的表达分布情况。 方法 采用western blot 技术对鲫鱼视网膜组织匀浆行免疫印迹,验证所用抗NR3A和抗NR3B抗体的特异性。用免疫组化荧光单标及共聚焦激光扫描显微技术,在鲫鱼视网膜垂直冰冻切片上研究NR3A和NR3B蛋白在鲫鱼视网膜特别是外层视网膜上的表达分布。 结果 western blot分析结果显示本实验所用抗NR3A和抗NR3B抗体分别较特异性地标记鲫鱼视网膜中的NR3A和NR3B蛋白。免疫荧光法结果显示NR3A的免疫阳性产物弥散分布在鲫鱼视网膜的外网层,呈点状或弥散状分布在内网层,内核层及神经节细胞层的不同种类细胞均有NR3A蛋白的分布。重点可见外核层细胞胞体、轴突和轴突终末上有NR3A的强阳性免疫反应。NR3B的免疫阳性产物弥散性分布在OPL和IPL,亦分布在INL和GCL少许细胞上,但阳性信号均比较弱。重点可见ONL只有部分光感受器细胞的胞体和轴突有较强的免疫阳性反应。 结论 NR3A和NR3B蛋白的广泛表达进一步表明NMDA参与外层及内层视网膜的信息传递。NR3亚基在光感受器细胞的表达表明其可能参与年龄相关性黄斑变性和遗传性视网膜退行性疾病发病过程中兴奋毒性导致的光感受器细胞凋亡,其在神经节细胞层的表达则表明NR3亚基也可能参与青光眼或视网膜缺血性疾病中兴奋毒性导致的神经节细胞凋亡。 |