目的 探讨肿瘤睾丸抗原NY-ESO-1致敏树突状细胞(dendritic cells DCs),诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T Lymphocyte,CTL)对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44的杀伤作用。 方法 自行构建NY-ESO-1基因的重组质粒pDC316/ NY-ESO-1,Ficoll法分离血获得单个核细胞,通过重组人集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素4(rhIL-4)诱导培养外周血来源的DCs,通过重组质粒转染DCs,LPS诱导DCs成熟,成熟DCs刺激特异性CTL细胞增殖。此CTL特异性杀伤HXO-RB44细胞株,通过MTT法检测CTL的增殖以及对肿瘤细胞的杀伤作用。 结果 重组质粒pDC316/ NY-ESO-1的目的片段序列与NY-ESO-1基因序列完全相同,酶切鉴定结果与预期一致。Western blot法以及免疫荧光检测结果显示NY-ESO-1在细胞株HXO-RB44中表达较为强烈。经rhGM-CSF和rhIL-4成功诱导出的外周血DCs,重组质粒转染后其表型分子分别是HLA-DR为42.1%,CD80为54.2%,CD83为39.7%,CD86为94.8%。pDC316/ NY-ESO-1质粒转染的DCs诱导的CTL组的增殖能力强于未转染组,此CTL对肿瘤细胞的杀伤作用明显强于未转染组和无DCs组,且效靶比为75:1(P<0.05)时杀伤率最强。 结论 NY-ESO-1质粒转染DCs诱导的CTL对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44具有特异性杀伤作用,为视网膜母细胞瘤免疫治疗提出了一条新的方法。 |