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| 不同氧浓度诱导下牛视网膜血管内皮细胞中丙酮酸激酶和血管内皮生长因子相关性的初步研究 |
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作者：徐翀 文章来源：上海市第十人民医院 点击数：274 更新时间：2012/9/13 
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目的 观察单独培养及与muller细胞共同培养的牛视网膜血管内皮细胞(BRVEC)在不同氧环境及糖环境下丙酮酸激酶(PKM1,PKM2)、血管内皮生长因子(VEGF)和HIF1α的表达变化及相互关系；探讨氧分压变化与牛视网膜血管内皮细胞中糖代谢及VEGF的相关性及可能机制。
方法 氧诱导造成BRVEC低氧模型（1%O2，5%O2）、常氧模型（10-12%O2，相当于视网膜实际正常氧分压），分为低氧高糖BRVEC组、低氧正常糖BRVEC组，低氧高糖muller cell共同培养BRVEC组、低氧正常糖muller cell共同培养BRVEC组和正常对照组，共分为10组。低氧诱导组为含1%、5%氧浓度下高糖与正常糖培养基的BRVEC组及与muller共同培养的BRVEC组干预培养24h；正常对照组为正常氧浓度（类似视网膜实际氧环境的10%氧浓度）及正常糖浓度下单独及共同培养的BRVEC24h.免疫荧光染色法观察正常对照组和低氧及高氧诱导组的BRVEC中PKM1，PKM2、VEGF以及HIF1α的表达。蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组间PKM1, PKM2、VEGF以及HIF1α的蛋白表达变化及相关性。
结果 免疫荧光染色结果显示，低氧诱导组BRVEC细胞质内见到VEGF表达，低氧诱导组BRVEC细胞核内PKM2较正常对照组明显增强。Western blot检测结果显示，低氧高糖诱导组HIF1α蛋白和PKM2蛋白表达均明显升高（1%O2组高于5%O2组），PKM2在低氧、正常氧、高氧浓度下的表达呈递减关系。muller细胞共同培养的BRVEC尽管处于1%O2浓度下，正常血糖组HIF1α及PKM2的表达都下调了，与muller细胞共同培养的BRVEC在1%O2浓度下高糖组的HIF1α和PKM2明显上调了。单独培养的BRVEC，随着氧浓度的增高PKM2呈下调趋势，1%，5% O2浓度时高糖培养使HIF1α表达上调了，10%O2浓度下（相当于视网膜正常氧浓度下）无论糖浓度如何，HIF1α没有明显的表达。
结论 低氧诱导的BRVEC中HIF1α, PKM2的表达增加，低氧及高糖使HIF1α及PKM2明显上调，muller细胞共培养可能下调了缺氧时HIF1α及PKM2的表达，muller细胞及PKM2在牛视网膜血管内皮细胞的异常代谢过程发挥了一定作用。 |
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