目的 探索氧化锌纳米粒子(ZnO NPs)对大鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)的体外毒性。 方法 采用MTT法检测ZnO NPs在不同浓度(分别为10, 5, 2.5, 1.25, 0.63, 0.32, 0.16µg/ml)、不同时间(分别为24、48和72小时)对RGC-5细胞的体外毒性,流式细胞仪检测不同浓度(10, 5, 2.5µg/ml)的ZnO NPs对RGC-5细胞的活性氧、线粒体膜电位水平的影响,实时荧光定量PCR检测对Caspase-12以及MMP-9基因表达的影响,ELISA方法检测RGC-5细胞内Caspase-12以及MMP-9 蛋白质的表达水平。 结果 ZnO NPs对RGC-5细胞的增殖有一定的抑制作用,并呈剂量以及时间依赖性。当ZnO NPs浓度不高于0.63µg/ml时,对细胞的增殖几乎无影响;流式细胞仪检测活性氧的表达水平发现,随着细胞培养基中ZnO NPs浓度的增高,活性氧的表达也随之增加,呈现剂量依赖性,与对照相比,有显著的统计学差异(p<0.01);而线粒体膜电位随着细胞培养基中ZnO NPs浓度的增高呈显著下降,并呈现剂量依赖性,与对照相比,有显著的统计学差异(p<0.01);实时荧光定量PCR以及ELISA检测结果发现,Caspase-12以及MMP-9的基因及蛋白表达随ZnO NPs的增加而增加,呈剂量依赖性,与对照组相比,Caspase-12以及MMP-9基因与蛋白的表达具有统计学差异(p<0.05)。 结论 ZnO NPs对RGC-5细胞的增殖有一定的抑制作用,并呈时间和剂量依赖性。ZnO NPs促使内质网以及线粒体产生的活性氧以及Caspase-12的过表达是诱发RGC-5细胞发生死亡的主要原因。 |