目的 研究BMSCs在体外定向分化为光感受器样细胞及光感受器细胞特异性标志物视紫红质、恢复蛋白的表达情况。 方法 取第2~4代的人BMSCs细胞株及第3代RPE细胞株进行实验。实验分两组:诱导组和对照组。诱导组: BMSCs与20ng/mlbFGF、20ng/mlEGF 及20ng/mlBDNF 的MSCM及RPE细胞培养液培养。对照组:单纯使用配制好的MSCM培养。应用免疫细胞化学检测不同诱导时间(3d、5d、7d)视紫红质蛋白的阳性表达率。 Realtime-PCR方法检测诱导7d后细胞视紫红质、恢复蛋白mRNA的表达情况。 结果 免疫细胞化学方法检测第3d即有视紫红质表达,第7d视紫红质阳性率为(29.8±2.3)%,对照组均未检测到视紫红质表达。诱导组均较对照组有显著性差异,p<0.01。在诱导7d后采用Realtime-PCR方法检测到诱导细胞有视紫红质、恢复蛋白mRNA的表达,对照组未见视紫红质、恢复蛋白mRNA表达。 结论 本研究证实采用含有细胞因子的培养液及RPE细胞培养液培养,BMSCs在体外能够诱导分化成光感受器样细胞,表达其特异性标志物视紫红质、恢复蛋白。 |