目的 研究年龄相关性白内障晶状体核不同组分晶体蛋白的组成,及不同硬度晶状体核中非水溶性蛋白质的组成。 方法 实验材料:选取白内障囊外摘除术中取材的晶状体核,分为软核(II级或以下)和硬核(III级或以上),正常透明晶状体作为对照。分别提取晶状体核中的水溶性蛋白质及非水溶性蛋白质进行双向电泳。用ImageMaster 2D Platinum 6.0软件对获得的蛋白图谱加以分析;再利用MALDI-TOF MS质谱仪鉴定分析,得到蛋白质点的肽质量指纹和肽序列标签;用Matrix science公司的Mascot软件搜索NCBInr数据库,获取蛋白质的信息。 结果 1. 采用ImageMaster 2D软件对白内障软核不同组分间晶体蛋白(水溶性蛋白质WS;非水溶性蛋白质WI)双向电泳结果进行分析,显示WS组和WI组蛋白斑点数分别为31个和26个,大部分相对分子量14 400~97 400,pI 5~9。高丰度蛋白质斑点相对分子质量分布在20 000~31 000,pI 6~8区域内。相差2倍以上表达的差异点有14个。对选取的14个蛋白质点进行MALDI-TOF MS分析,经数据库检索后鉴定出6种蛋白质。其中3种蛋白质表达下调(γS-晶状体蛋白、βA3-晶状体蛋白、βA4-晶状体蛋白),1种蛋白质表达上调(βB1-晶状体蛋白),2种蛋白质表达缺失(截取的人βB1-晶状体蛋白A链、截取的人γ D-晶状体蛋白X链)。 2. 正常晶状体核和不同硬度白内障晶状体核(软核、硬核)的2-DE图谱中所有蛋白质斑点进行MALDI-TOF MS分析,经数据库检索得出:正常晶状体核非水溶性蛋白质鉴定出αA-、αB-、大部分β晶体蛋白和γS晶体蛋白;白内障软核非水溶性蛋白质鉴定出部分β晶体蛋白和γS晶体蛋白;白内障硬核非水溶性蛋白仅鉴定出小部分β晶体蛋白。 结论 1. 年龄相关性白内障晶状体软核不同组分晶状体蛋白中主要由β-晶状体蛋白组成,与非水溶性晶状体蛋白质相比,水溶性蛋白质鉴定出γ D-晶状体蛋白,而βA4-晶状体蛋白阙如。 2. 随着白内障晶状体核硬度的增加,不仅α-晶体蛋白阙如且β-晶体蛋白鉴定出的种类越来越少,说明α、β晶体蛋白在引起晶状体蛋白质不溶性增加,晶状体老化的过程中起重要作用;同时,γS晶体蛋白组分降低,说明γS晶体蛋白在维持晶状体透明度中作用明显。 |