目的 探讨大鼠来源的视网膜前体细胞(Retinal Progenitor Cells RPCs)在体外经血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor VEGF)作用下诱导分化成血管内皮细胞的可能性。 方法 取胎龄17天的SD大鼠的视网膜前体细胞,在RPCs培养液中(含10ng/ml bFGF、20ng/ml EGF)体外悬浮培养成神经球,使用流式细胞仪对细胞性质进行鉴定。取第二代RPCs神经球,分为4组,实验组分别经含10 ng/ml 、30 ng/ml 、50 ng/ml VEGF诱导分化液(去除bFGF、EGF的RPCs培养液)定向诱导RPCs向内皮细胞分化,对照组使用RPCs培养液培养。诱导分化6天后使用光镜观察RPCs形态学变化,流式细胞仪检测内皮特异性标志的表达变化。 结果 培养早期PRCs逐渐形成数个至数十个细胞组成的细胞团即神经球样结构,第6天收集细胞球经流式细胞学检测Nestin阳性表达的细胞占80.57%。CD31、CD34阴性 。经VEGF诱导分化后6天,光镜下对照组RPCs逐渐伸出突起,细胞球逐渐变扁平且不规则,相邻细胞球逐渐交织成网状。实验组PRCs仍保持神经球样形态,形态规则,球体大小不一,基本无突起伸出,并且球体数量逐渐增多,体积逐渐增大,周边细胞边界清晰,折光性强,中心部折光性较弱。随着VEGF浓度的增加球体呈增多、增大趋势。流式细胞学检测Nestin阳性表达率对照组62.56%,CD31、34仍为阴性。实验组随着VEGF浓度的增高细胞的Nestin阳性表达率分别为72.23%、85.65%、90.21%,CD31、CD34微量阳性或者阴性。对照组和实验组之间、各实验组之间Nestin阳性率差别具有统计学意义,CD31、CD34表达率差别无统计学意义。 结论 大鼠胚胎原代视网膜前体细胞表现出神经干细胞的标记。在不同浓度VEGF的诱导下能够保持前体细胞旺盛的增殖能力,在一定范围内随着浓度的增高VEGF促增殖能力也逐渐增强,但是促进RPCs诱导分化成血管内皮细胞的可能性较低。 |