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| 改良内皮抑素基因对大鼠角膜新生血管血管内皮因子及其受体表达的抑制作用 |
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作者：刘平 文章来源：哈尔滨医科大学附属第一医院 点击数：350 更新时间：2012/9/13 
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目的 探讨改良内皮抑素（ES）基因对大鼠角膜新生血管（CNV）中血管内皮生长因子（VEGF）及其血管内皮生长因子受体因子2（Flk-1）表达的影响及作用机制。
方法 102只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为对照模型组、pCI空载体组、pCI-ES转染组、pCI- RGDRGD-ES转染组，每组24只；正常组6只。用浸有1 mol/L NaOH溶液的直径3 mm圆形滤纸快速贴于大鼠角膜中央40 s建立角膜碱烧伤CNV模型，以pCI质粒作为改良前后ES基因的表达载体，每周2次结膜下注射3 μg含质粒的转染液进行基因治疗。每日裂隙灯显微镜下观察角膜水肿及CNV生长情况，计算CNV面积。于碱烧伤后1、4、7、14 d用过量麻醉法处死模型鼠并获取角膜组织，用免疫组织化学法检测CNV内皮细胞中CD34的表达以计算CNV密度，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白印迹法（Western blot）分别检测角膜VEGF mRNA及Flk-1在角膜中的表达。
结果 角膜碱烧伤后7~14 d，pCI-ES转染组、pCI- RGDRGD-ES转染组CNV面积均明显小于pCI空载体组和模型组，CNV密度均明显小于pCI空载体组和模型组，差异均有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；pCI-RGDRGD-ES转染组CNV面积均明显小于pCI-ES转染组，CNV密度均明显少于pCI-ES转染组，差异均有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。碱烧伤后4 d，pCI-ES转染组、pCI- RGDRGD-ES转染组大鼠角膜Flk-1蛋白表达水平明显低于正常对照组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）；碱烧伤后4 d，pCI-ES转染组、pCI- RGDRGD-ES转染组大鼠角膜VEGF mRNA表达水平明显低于正常对照组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）；pCI-RGDRGD-ES转染组大鼠角膜VEGF mRNA表达水平明显低于pCI-ES转染组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论 结膜下注射ES基因或RGDRGD-ES基因均能抑制碱烧伤诱导的CNV，但RGDRGD-ES基因对CNV的抑制作用更强，其作用机制为抑制VEGF及其受体Flk-1的表达。 |
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