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| 人突变体OPTN（E50K）转基因鼠的鉴定及E50K突变致RGCs凋亡的机制研究 |
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作者：原慧萍 文章来源：哈尔滨医科大学附属第二医院 点击数：346 更新时间：2012/9/13 
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目的 建立人突变体C-kit-OPTN(E50K)/ C57转基因小鼠杂交系，并对该转基因鼠表型进行鉴定，探讨OPTN（E50K）突变对BDNF表达的影响在转基因小鼠青光眼模型中视网膜神经节细胞（Retinal ganglial cells，RGCs）丢失的分子作用机制。
方法 C-kit-OPTN(E50K)/ C57转基因小鼠按照同一Founder建立杂交系原则建系。利用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)监测外源OPTN(E50K)基因传递情况。利用TonoPen眼压笔进行眼压监测。利用HE染色法，检测小鼠视网膜厚度。利用荧光金逆行标记RGCs技术，检测RGCs细胞存活情况，并采用NeuN免疫组织化学方法进行验证。利用Real-time PCR方法定量检测小鼠视网膜BDNF mRNA水平，利用Western blot方法检测小鼠视网膜BDNF，OPTN蛋白表达水平，CREB蛋白磷酸化水平。利用组织免疫荧光技术检测小鼠视网膜BNDF，OPTN蛋白表达定位。
结果 C-kit-OPTN(E50K)/ C57转基因小鼠外源基因可以稳定传递给下一代。12与16月龄OPTN(E50K)转基因小鼠眼压与野生小鼠相比无明显差异（P>0.05）；赤道部全层视网膜厚度明显降低 (P<0.05)；RGCs存活数量明显减少(P<0.05)；视网膜CREB磷酸化水平下降(P<0.05)；BDNF mRNA水平和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。E50K转基因小鼠OPTN，BDNF蛋白在视网膜各层均有表达，但在RGCs细胞层高表达。
结论 人突变体OPTN（E50K）转基因小鼠模型杂交系建立成功，外源OPTN(E50K)突变基因能稳定在C-kit-OPTN(E50K)/ C57转基因小鼠杂交系传递并表达。该小鼠在生长发育过程中眼压保持正常范围，具有正常眼压型青光眼的特征。该转基因杂交系小鼠视网膜厚度的降低和RGCs的丢失呈非眼压依赖性。OPTN(E50K)突变可以降低转基因小鼠视网膜内源性BDNF的表达水平及小鼠视网膜CREB磷酸化水平进而导致RGCs的丢失。人突变体OPTN（E50K）转基因小鼠模型杂交系建立成功，将为青光眼提供为更理想的动物模型，进一步为研究青光眼发病机制，治疗方法提供更理想的平台。 |
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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