目的 研究体外培养的猫角膜内皮细胞的活性,并以人羊膜为载体进行培养的猫同种异体角膜内皮细胞移植的动物实验,为培养的人角膜内皮细胞移植技术的临床应用奠定基础。 方法 (1)体外培养猫眼角膜内皮细胞并种植于人羊膜载体上,观察其活性、生长状况及生物学特性;(2)将种植在人羊膜载体上的培养第三代猫角膜内皮细胞植入去除自体角膜内皮细胞及后弹力膜的猫眼,术后每日对术眼行裂隙灯显微镜观察,每周照相2次,并于术后不同时间摘除术眼制备光、电镜标本,观察植入的内皮细胞单层的形态及功能和羊膜载体的变化。 结果(1)倒置显微镜及扫描电镜观察:培养三代猫角膜内皮细胞能在人羊膜上形成完整的内皮细胞单层,细胞密度约2500个/mm2;(2)在培养的同种异体角膜内皮细胞移植术后,裂隙灯显微镜观察显示:术后6~12h植片水肿开始减轻,透明度增加;24~48h后植片恢复透明,维持正常角膜厚度; 植片保持透明无水肿时间为3周至6月;(3)术后2周、4周、8周及12周分别采取保持透明的角膜植片制备光、电镜标本进行观察,证实培养的角膜内皮细胞可在受体前房内存活,保持接近正常内皮的形态学特点,并发挥其生理功能;(4)术后3周4例术眼植片出现不同程度的水肿、混浊。8例术眼植片在术后2周至6月的观察期内始终保持透明无水肿。 结论(1)猫角膜内皮细胞能够在体外培养形成完整的细胞单层;(2)以人羊膜为载体行培养的传三代猫角膜内皮细胞移植术后,植入内皮能在受体前房环境中长期存活并发挥正常生理功能;(3)培养传代角膜内皮细胞在移植后其免疫排斥反应无明显增加。 |