目的:通过体外实验探讨IL-1β(炎症压力)和高渗微环境对移植的角膜缘干细胞存活和功能的影响。
方法:采用TKE2小鼠角膜缘干/祖细胞系为模型,分别用IL-1 β 和 NaCl处理细胞,检测处理前后克隆形成能力、克隆直径、细胞凋亡、细胞周期的变化,同时检测处理因子撤除后干细胞的恢复能力。
结果:处理8天后,TKE2细胞变得大而扁平,形成的干细胞克隆变得疏散,克隆数量及克隆直径随着处理浓度的增加而降低,呈浓度依赖效应。NaCl处理能显著引起细胞的凋亡甚至坏死,并呈剂量依赖效应,但IL-1β只在高浓度引起少量细胞凋亡,作用不明显; NaCl处理能引起TKE2 S期细胞的明显减少,并使细胞长期阻滞在G2-M期,而IL-1β对TKE2细胞周期无明显影响。处理8天后,撤除处理因子,并重新以同样密度接种培养8天,检测克隆形成能力的回复情况。发现,IL-1β处理的细胞能够较快地恢复其克隆形成能力,而NaCl处理后细胞的回复能力较差,克隆直径明显偏小。
结论:持续性炎症(IL-1β)和高渗透压(NaCl,干眼因素)对角膜缘干细胞的存活和功能的影响有所不同,IL-1β可暂时抑制角膜缘干细胞的功能,一旦去除可快速回复;但在高渗透压条件下,干细胞表现为细胞周期的长期阻滞、凋亡甚至坏死,且短时间难以回复,为角膜缘干细胞移植治疗效果的影响因素提供了新的理论指导。 |