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转人CTLA-4基因猪-SD大鼠异种角膜移植研究           ★★★
转人CTLA-4基因猪-SD大鼠异种角膜移植研究
作者:安慧娟 文章来源:河南省眼科研究所 点击数:389 更新时间:2012/9/13
目的 用转人CTLA-4基因广西巴马猪角膜行SD大鼠异种角膜移植手术,观察异种角膜移植后排斥反应性,探讨用于人异种角膜移植的可能性
方法 1、提取猪角膜组织中RNA,检测CTLA-4基因表达情况。2、猪-大鼠穿透型角膜移植。实验组使用转人CTLA-4基因广西巴马猪角膜作为供体,对照组用野生型普通巴马猪角膜作为供体,受体均为SD雌性大鼠。3、术后定期进行临床观察,RI评分。定期处死大鼠用Western Blot方法检测角膜中CTLA-4Ig表达量。ELISA方法检测角膜中各种细胞因子的含量。免疫组织化学方法检测各种细胞浸润情况。
结果 1、Real-Time PCR结果显示,猪角膜组织、睫状肌和虹膜中均有人CTLA-4核酸表达。Western blot结果显示,异种移植后,随着时间的延长,人CTLA-4Ig在角膜植片中含量逐渐减低。2、临床观察结果显示,实验组术后第7±3.5天开始出现排斥反应,对照组术后5±2.5天开始出现排斥反应。3、实验组和对照组角膜组织内细胞因子含量在第5天开始逐渐升高,第12天左右达到高峰,一个月后逐渐趋于正常。4、移植术后角膜组织病理学检查结果表明,实验组和对照组在猪-鼠角膜移植后第3天,供-受体角膜均已长为一体,愈合良好,基质层内可见少量炎症细胞浸润。移植后第14天,手术完全愈合,手术瘢痕清晰可见。术后第36天,移植后角膜生长正常,角膜透明,无炎症水肿和新生血管长入。
结论 1. 转人CTLA-4基因猪-大鼠异种角膜移植术后联合应用FK506抗免疫排斥反应治疗1个月,然后停止FK506治疗,仍然可使70%以上的大鼠长期保持角膜透明度3个月以上(部分大鼠角膜出现新生血管长入)。2. 实验组术后不用任何抗免疫排斥药物治疗,角膜植片存活率可维持17±3.5天;对照组角膜植片存活率可维持14±3.5天。3. 转人CTLA-4基因猪角膜有望用于作为人角膜移植的替代品。
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