目的 检测HSV-1感染的HCE细胞中HSV-1 miR-H6的表达变化,观察HSV-1 miR-H6对HSV-1复制和interleukin (IL)-6释放的影响。
方法 以感染复数(multiplicity of infection, MOI)为5、1、0.1的HSV-1 ( F株)感染体外培养HCE,在HSV-1感染后24h时Real time PCR检测miR-H6。Western blot检测HCE细胞中ICP4蛋白的表达;空斑试验观察miR-H6对HSV-1复制的影响;ELISA检测miR-H6 对IL-6释放的影响;双向电泳检测培养液中外分泌蛋白的表达。 结果 Real time PCR发现在HSV-1感染的HCE和RPE细胞中miR-H6的表达量随病毒初始感染量增加而增加。将miR-H6 mimics转染至HCE细胞再接种病毒,空斑试验检测到miR-H6可明显减少HSV-1形成的空斑面积(p<0.05),Western blot检测到miR-H6可降低ICP4蛋白的表达(p<0.05)。ELISA检测miR-H6 可以减少IL-6的释放。双向电泳发现与正常HCE细胞相比,感染了HSV-1的细胞培养液中外分泌蛋白明显减少,但也存在特征性的高丰度蛋白,转染了miR-H6 mimics再感染HSV-1的培养液中这些高丰度蛋白的表达被抑制。 结论 miR-H6与HSV-1感染的HCE细胞中病毒量呈正相关;转染miR-H6能调控ICP4蛋白的表达,抑制病毒复制,并减少感染细胞IL-6的释放。
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