目的 既往的研究证据表明强光照射可导致视网膜细胞的不可逆性凋亡。然而光化学损伤研究结果仍面临众多因素的影响,如光源发热带来的温度变化以及光照不均一性等。本研究力图设计一种调控温度和光照强度的全新体外光化学损伤装置,并基于人视网膜色素上皮细胞进行光化学损伤的分子机理研究。 方法 本研究将装置的搭建分为光控与温控两部分进行,基于LED光源实现光控的稳定与均一性,以伯尔贴效应为基础的制冷片则可做到温控的均一升降,再辅以基于多点阵列排布的光照与温度传感器实时监控与反馈调节机制,构建成温度可控式光强可调的新型仪器装置。结合人RPE细胞系的体外培养,利用该装置对RPE细胞在温控条件下的定量定时的光照处理,通过细胞免疫化学和RT-PCR等技术观察细胞发生凋亡程度和分子通路。 结果 自主研发的装置的光照可调范围为0-7500lux,温度调控范围为室温-5℃至15℃,光照波动在低于1.3%,温度波动在1.1%以内。经过反复测试,稳定性和重复性极佳。RPE细胞的体外光化学损伤实验有效证明温控与定量光化学损伤研究的可行性,通过分子生物学方法观察到氧化应激是RPE细胞凋亡的机理之一。 结论 通过本研究自主研发了稳定性与可重复性强的定量光化学损伤研究仪器,并通过视网膜细胞光损伤实验验证了仪器的可行性,为进一步研究视网膜光损伤的基础研究提供科学准确的实验数据的同时,尚能为进行相同领域研究的学者提供统一可行的定量研究设备。 |