目的 构建piggyBac 转座子调节的外源性Rb基因的表达系统,转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50,探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用。 方法 通过RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染 SO-RB50细胞,采用考马斯亮蓝染色、荧光定量PCR以及免疫荧光实验检测piggyBac转座子介导的目的基因与宿主细胞基因组的整合效率;通过MTT实验证明通过piggyBac转座子转染的外源性Rb基因对细胞活性产生的影响。 结果 piggyBac转座子系统的转染效率最高(P<0.05),经荧光定量PCR及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达,并且通过MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著(P<0.05)。 结论 piggyBac转座子介导的外源性Rb基因可对SO-RB50细胞活性产生长期影响,提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体。 |