目的 分析高糖条件下HUVEC和糖尿病鼠视网膜中microRNAs及其调控生长因子的表达变化。
方法 HUVEC分为两组,对照组和实验组,对照组应用正常培养基培养;高糖组在正常培养基中加入25mmol/L葡萄糖培养。分别在30min,1h,3h,6h,12h,24h,48h 收集细胞,应用q RT-PCR对实验组和对照组microRNA-126和VEGF进行检测。昆明小鼠随机分成实验组和对照组。实验组腹腔注射链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)形成1型糖尿病模型,72小时后采尾血检测随机血糖,≥16.7mmol/l即为实验组建模成功。对照组腹腔注射柠檬酸缓冲液。每周测量实验各组小鼠体质量和血糖1次。在成模后8周应用q RT-PCR对视网膜microRNA-126和VEGF进行检测。
结果 在高糖培养条件下,HUVEC中VEGF表达升高,随时间变化呈逐渐上升趋势;而microRNA-126变化呈相反趋势。与对照组相比,VEGF表达在30min,1h,3h,6h,12h,24h 和48h后分别升高24%(p<0.05)、28%(p<0.05)、40%(p<0.05)、44%(p<0.01)、53%(p<0.01)、 57%(p<0.005)和62%(p<0.005)。而microRNA-126的表达与对照组相比则分别下降41%(p<0.25)、34%(p<0.05)、23%(p<0.1)、37%(p<0.01)、46%(p<0.05)、56%(p<0.05)和73%(p<0.025)。糖尿病鼠STZ腹腔注射至8周时,糖尿病组平均血糖24.81±4.86mmol/l,正常组平均血糖6.47±0.6mmol/l。二者之间差异显著,具有统计学意义(t=12.594,p<0.001)。期间,糖尿病组血糖均>16.7mmol/l,正常组保持在5.6-7.4mmol/l。q RT- PCR结果显示, 与对照组相比,microRNA-126在糖尿病鼠表达降低86%,VEGF表达升高40%。
结论 在高糖培养HUVEC和糖尿病鼠视网膜中VEGF表达升高而microRNA-126表达降低,这一结果提示我们microRNA-126在糖尿病视网膜病变发展中起调控作用。