| 目的 构建用于治疗和预防单纯疱疹病毒性角膜炎的核酸疫苗并初步观察其免疫效果,探讨截短HSV-1 gB（ pcDNA3-gBt）基因作为基因疫苗的可能性。方法 利用PCR技术从HSV-1 SM44株基因组中扩增出的编码HSV-gBt含有已去除部分N基端（39bp）的信号肽序列和部分胞外区的基因组序列，经鉴定后将目的基因定向插入真核表达质粒pcHNA3载体中,构建出重组真核表达质粒pcDNA3-gBt(全长1482bp), 按照分子克隆的方法进行pcDNA3-gBt的大量提取，以无水乙醇方法进行纯化，纯化质粒的OD260/OD280达到1.8以上后免疫小鼠，通过中和试验和ELISA方法检测抗体效价，病毒攻击保护试验观察疫苗的保护性。结果 利用PCR方法可从HSV-1 SM44 DNA模板上扩增约1.5kb的扩增产物，与目的基因片段大小相当。目的基因定向插入pcDNA3 中并对其进行鉴定测序结果表明，小片断分子量约为1.5kb,与目的基因大小相同，长片断为5.4kb与质粒pcDNA3位置一致：测序结果表明目的基因插入方向正确，所克隆的基因与HSV-1 F株的gB基因序列比较，1482个碱基中仅有3个发生变异，碱基序列一致性达99.5%，与其它同毒株gB的序列同源性达99.0%；gBt氨基酸序列与HSV-1 F株的gB氨基酸序列比较，494个氨基酸中，有1个发生变异，第223个氨基酸由丙氨酸→苏氨酸，一致性达99.9%，表明pcDNA3-gBt重组真核表达质粒构建成功。实验动物产生了对HSV-1特异性的抗体（抗体滴度：ELISA法1:364，中和试验法：1:64），病毒攻击实验表明PcDNA3-gBt有免疫保护作用。结论 构建重组真核表达质粒pcDNA3-gBt用于接种小鼠可以引导特异性免疫反应，并具有良好的免疫保护作用，有可能作为基因疫苗。
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