目的:观察补肾活血法对体外纯化培养的视网膜Müller细胞在高糖、低剂量(AGEs)及高剂量AGEs干预条件下的保护作用,并对其作用机制进行初步探讨,为补肾活血法在糖尿病视网膜病变(DR)的临床应用提供一定的实验依据。 方法: 1. 利用改进的酶消化法培养新生SD大鼠视网膜Müller细胞。2. 将纯化的视网膜Müller细胞分别置于高糖(终浓度为50mmol/L)、低剂量AGEs(终浓度为50mg/L)及高剂量AGEs(终浓度为100mg/L)下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、正常中药干预组,高糖组、高糖中药干预组,低剂量AGEs组、低剂量AGEs中药干预组,高剂量AGEs组、高剂量AGEs中药干预组。3. 以酶联免疫吸附法(ELISA)对细胞培养上清液进行乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、脯氨酸羟化酶(PHD)1.2.3含量的测定;并以聚合酶链法(RT-PCR)测定视网膜Müller细胞HIF-1αmRNA、及VEGFmRNA的表达。SPSS13.0对所得数据进行统计学分析。 结果:1.补肾活血中药复方含药血清能降低本实验中不同干预条件下视网膜Müller细胞LDH漏出量。 2.补肾活血中药复方含药血清能减少本实验中不同干预条件下HIF-1α及HIF-1αmRNA的表达。3.补肾活血中药复方含药血清能减少本实验中不同干预条件下VEGF及VEGFmRNA的表达。4. 补肾活血中药复方含药血清能提高高糖条件下PHD1的活性,降低本实验中不同干预条件下PHD2的表达。 |