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| tTG硫代反义寡核苷酸抑制牛眼小梁细胞tTG的表达 |
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作者：胡义珍 … 文章来源：华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科 点击数：1465 更新时间：2005/5/27 20:36:02 
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| 目的: 观察组织型谷氨酰胺转移酶（tissue transglutaminase, tTG）硫代磷酸化修饰反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide, ASODN）对体外培养牛眼小梁细胞（bovine trabecular meshwork cell, BTMC）tTG在mRNA水平和蛋白水平表达的影响，初步探讨tTG-ASDON在治疗原发性开角型青光眼（primary open-angle glaucoma, POAG）中的可能性。方法: 根据牛tTG mRNA的二级结构设计、选择并合成ASODN1、ASODN2，用阳离子脂质体Lipofectamin包埋后转染BTMC， 应用半定量RT-PCR法和免疫组化染色法检测转染BTMC后tTG在mRNA和蛋白水平表达的变化。同时，采用HMIAS-2000高清晰彩色医学图文分析系统采集、处理图象和应用SPSS11.5软件进行统计分析，探讨tTG- ASODN对BTMC的tTG mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:经Lipofectamine介导ASDON1、ASDON2转染BTMC后，RT-PCR产物电泳结果显示正常对照组、ASDON1组和ASDON2组均在433bp处出现特异性的tTG基因条带，但ASDON1组和ASDON2组基因表达明显低于正常对照组；各组均出现249bp的基因条带为内参照3-磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH）的扩增产物且表达无明显差别。激光灰度值扫描进行半定量分析后，ASDON1组和ASDON2组的tTG/GAPDH灰度比值分别为1.0695+/-0.0009、1.0662+/-0.0007，与正常对照组的tTG/GAPDH灰度比值1.0185+/-0.0024比较，均有显著性差异（P=0.000）。ASDON1组和ASDON2组之间比较无显著性差异（P=0.146）；同时，正常对照组、ASDON1 组和ASDON2组免疫组化染色均为阳性，但经Lipofectamine介导ASDON1、ASDON2转染BTMC后，tTG的蛋白表达水平显著下降。正常对照组、ASDON1 组和ASDON2组的平均灰度值为154.3500+/-0.8036、171.9333+/-0.8401、171.7369+/-0.7204（P<0.05）。结论:tTG- ASODN可明显下调BTMC的tTG在mRNA和蛋白水平的表达，提示tTG- ASODN有望在POAG的治疗中发挥重要作用。
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| 会议投稿录入：risking023 责任编辑：毛进 |
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