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| 腺相关病毒介导绿色荧光蛋白基因在晶状体上皮细胞中的转染和表达 |
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作者：丁芝祥 谭… 文章来源：中南大学湘雅医院眼科 点击数：1733 更新时间：2005/6/14 20:10:28 
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| 目的： 研究重组腺相关病毒(rAAV)载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因（GFP）对体外培养兔晶状体上皮细胞(LECs)的转染和表达，为rAAV携带目的基因防治后囊膜混浊提供理论依据。方法： 组织块培养法体外培养兔LECs，按感染复数（MOI）为10（3次幂）、10（4次幂）、10（5次幂）、4×10（5次幂）、10（6次幂）转染传三代细胞，转染后1、3、5、7、9、11天在倒置荧光显微镜下观察LECs中GFP表达阳性情况。记录200个细胞中GFP阳性表达所占的百分比。当GFP表达稳定后共聚焦显微镜照相。倒置显微镜观察rAAV转染对LECs生长和形态的影响。结果： MOI=10（3次幂）时，转染后72小时LECs中GFP开始表达，MOI=10（4次幂）、10（5次幂）、4×10（5次幂）、10（6次幂)时转染后24小时便可见GFP阳性表达。随着MOI值的增高及时间的延长，LECs中GFP的表达效率逐渐增高，同时，GFP的表达强度逐渐增强，转染后9-11天达到高峰，此时，MOI=10（3次幂）、10（4次幂）、10（5次幂）、4×10（5次幂）、10（6次幂）的转导效率分别为21%、41%、55%、86%、94% 。倒置显微镜观察对照组和转染组LECs的生长和形态特征无明显改变。结论： 腺相关病毒可以携带报告基因转染晶状体上皮细胞，并且转染效率高，腺相关病毒携带目的基因防治后囊膜混浊是可行的。 |
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| 会议投稿录入：AXIANG11 责任编辑：毛进 |
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