| 目的 羊膜移植对MMP-9及TIMP-1在角膜HSV-1感染引起新生血管中的作用的影响以及MMP-9及TIMP-1在角膜新生血管形成中的作用。方法：6 至8 周龄雌性BalB/c小鼠40只, ,实验前双眼前节检查正常。将小鼠随机分为实验组和对照组。采用乙醚吸入法麻醉两组小鼠,每只鼠均取右眼为实验眼。显微镜下十字交叉搔刮右眼角膜上皮后点滴Ⅰ型单纯疱疹病毒( herpes simplex virus－Ⅰ)5μl (105PFU)于角膜上,按摩眼球并滞留20s。感染眼每日用氯霉素滴眼液滴眼。对实验组小鼠右眼角膜感染上HSV-1后24h行羊膜移植术。分别在HSV-1感染后和羊膜移植后的2、7、14天，用颈椎脱臼法处死两组小鼠，迅速摘除右眼球，经一系列组织免疫方法处理行免疫组织化学染色。阴性对照以PBS代替兔抗小鼠MMP-9及TIMP-1多克隆抗体，方法照旧。通过免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠感染HSV-1后MMP-9及TIMP-1在角膜中的分布及其平均吸光度值同时手术后2d开始用裂隙灯显微镜观察眼表情况。结果 免疫组化结果：HSV－1 角膜感染后第2 d,可见MMP－9及TIMP－1的染色位于上皮下基质层树枝状损害区或上皮抓痕处的炎性细胞和角膜细胞中。第7 dMMP－9 的染色较第2d增强，基质层可见大量新生血管，且血管内皮细胞可见表达，TIMP-1阳性染色较对照组强。第14d可见MMP 及TIMP阳性染色略为减轻。对照组中的MMP-9阳性染色明显强于实验组及TIMP-1阳性染色明显弱于实验组。阴性对照采用PBS 代替羊抗小鼠MMP-9一抗,HSV-1感染后7 d 角膜无棕黄色颗粒。裂隙灯观察结果：对照组:角膜上皮层在术后2～3d 愈合,以后发生上皮缺损,反反复复,形成慢性持续性上皮缺损。新生血管多从下方向角膜中央延伸,以后覆盖整个角膜,多位于角膜前1/ 3 的浅基质层；实验组：术后4～7 d ,上皮细胞向羊膜植片中央向心性生长,手术后12d左右角膜上皮化完成;手术后羊膜呈灰白色,较厚 ,随后逐渐透明变薄,恢复正常厚度逐渐溶解，未见羊膜脱落感染;在手术后第4d 可见有新生血管自角膜缘长入羊膜下,角膜中央保持无血管。结论： HSV-1感染角膜导致了MMP-9表达增加，MMP-9在新生血管形成的过程中起一定作用。羊膜可能具有抑制MMP－9 在角膜上皮及多形核白细胞(PMN) 中表达的作用，而且羊膜同时促使TIMP－1在炎症后期表达水平升高,从而抑制MMP－9 的活性,促使炎症消退。 |
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