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| 单纯疱疹病毒I型糖蛋白B基因疫苗的构建及初步免疫学研究 |
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作者：孟祥俊 吴… 文章来源：吉林大学第二临床医院眼科130041 点击数：1550 更新时间：2005/6/15 21:58:05 
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摘 要
目的：构建用于治疗和预防单纯疱疹病毒性角膜炎的核酸疫苗，对此疫苗进行初步免疫学研究，探讨HSV-1 gB基因作为基因疫苗的可能性。
方法：本研究利用PCR技术从HSV-1 SM44株基因组中扩增出编码HSV-1 gB去除N端部分信号肽序列(39bp)的基因片断（2673bp），定向插入真核表达质粒pcDNA3载体中,构建出重组真核表达质粒pcDNA-gB,并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定；通过中和试验、ELISA方法检测用pcDNA-gB三次肌肉接种小鼠的免疫效果，经过双酶切酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。
结果：双酶切重组质粒pcDNA-gB，电泳可见两条带，分别为目的基因（2.7kb）和线性质粒pcDNA3（5.4kb）；以重组质粒pcDNA-gB为模板进行PCR扩增，在2.7kb位置扩增出特异的产物；测序结果表明，克隆基因插入方向正确，与GeneBank中登录的HSV-1F株gB基因序列比较，同源性达99.5%；实验小鼠产生了对HSV-1特异性的抗体（抗体滴度：中和试验法1:41，ELISA法1:213），并对小鼠接受病毒HSV-1攻击（存活率80%）。可以确定该重组质粒构建成功，且 HSV-1 gB的2673个碱基中仅有3个发生变异，碱基序列一致性达99.5%，与HSV-1不同毒株gB的序列也高度同源，同源性达99.0%；gB1推测的氨基酸序列与HSV-1 F株的gB氨基酸序列比较，891个氨基酸中，有1个发生变异，且变异的碱基对HSV-1 gB N端糖基化部位、连续抗原表位无影响，其免疫原性应该不会受到影响。为了确定pcDNA-gB能否在动物体内正确表达及是否具有免疫保护作用，进行了初步的动物实验，利用pcDNA-gB免疫接种小鼠，经ELISA方法在小鼠血清中检测到了HSV-1特异性的抗体（抗体滴度：中和试验法1：41，ELISA法1：213），表明pcDNA-gB能够在小鼠体内表达gB蛋白；并诱导产生了特异性免疫应答，这种特异性的免疫应答减低了攻击病毒引起的小鼠死亡率（存活率80%），对小鼠具有良好的保护作用，与文献报道的一致，但是否能够防止发生潜伏感染尚需进一步研究。
结论：经证实成功地构建了重组真核表达质粒pcDNA-gB，用其接种小鼠可以诱导产生特性免疫反应，并具有免疫保护作用；为进一步构建病毒糖蛋白联合疫苗并最终用于单疱病毒角膜炎的预防和治疗奠定理论基础。
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| 会议投稿录入：mengzhao 责任编辑：毛进 |
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