目的:探讨吲哚胺 2,3-二氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO)在前房相关免疫偏离(anterior chamber associated immune deviation, ACAID)形成中的作用。
方法:将卵白蛋白(ovalbumin, OVA)100 μg/5μL注入BALB/c小鼠(雌性,6-8周龄,体重20-26克)前房,以诱导ACAID。分别于前房注射后第3、7、10、14天,摘除小鼠脾脏,进行荧光定量PCR、Western免疫印迹和免疫组织化学染色,检测IDO的表达及其动态变化;采用腹腔注射IDO的特异性抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-DL-tryptophan, 1-MT)的方法,阻断IDO的作用,以迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity, DTH)作为指标,评价ACAID能否诱导成功。应用细胞内细胞因子染色和ELASA方法检测细胞因子IFN-γ、IL-4和TGF-β1的水平。
结果:正常小鼠脾组织IDO基因表达水平较低;前房注射OVA后第3天,IDO基因表达水平开始增高,但与正常对照组相比无统计学意义;前房注射OVA后第7天,IDO基因表达水平显著增高,IDO基因拷贝数大约是正常对照组的两倍,与正常对照组相比有统计学意义,此后,IDO基因维持高水平的表达。Western免疫印迹的结果显示IDO蛋白的表达有相似的趋势。免疫组化的结果显示正常小鼠脾组织中有少量的IDO+细胞,前房注射OVA后第3天,IDO+细胞开始增多,但与正常对照组相比无统计学意义;第7、10和14天,IDO+细胞明显增多,与正常对照组相比有统计学意义。阻断IDO的作用后,小鼠诱发了强烈的DTH,ACAID不能形成。同时,在ACAID小鼠,IFN-γ的水平降低,IL-4的水平增高,即Th1型免疫反应受抑制,而在1-MT小鼠中,IFN-γ的水平明显增高,IL-4检测不到,即Th1型反应占优势。ACAID形成后,脾细胞分泌大量的TGF-β1。
结论:ACAID形成后,IDO的基因和蛋白表达水平明显上调,脾细胞分泌大量的TGF-β1可能促进IDO表达水平的上调,而且IDO在ACAID的形成中发挥重要作用。
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