| 目的 构建神经营养素-4（neurotrophin-4 NT4）与神经短肽（NAPVSIPQ NAP）融合基因重组腺伴随病毒，为进一步对视网膜色素上皮疾病进行基因治疗奠定基础。
方法 NT4-NAP融合基因构建及序列分析采用非对称互补引物/模板法。以pGFP-N2质粒作模板，使用PCR方法获得GFP片断。将该片断插入到pSSHG-CMV穿梭质粒，构建为重组pSSHG-CMV-GFP穿梭质粒。制备表达NAP和GFP的两种重组腺伴病毒rAAV-GFP和rAAV-NAP；纯化病毒，以斑点杂交法测定病毒滴度。融合基因重组于pGEM-Teasy质粒中，筛选得到含有NT4-NAP基因的克隆，采用Sanger单链末端终止法测出全部的核苷酸序列。
结果 经DNA测序,限制性内切酶酶切等方法证实已成功地将NAP重组到NT4信号肽和前导序列的3c端。标准AAV质粒的浓度为1g/ml,根据杂交结果，可计算出每ml中的重组病毒颗粒数（重组病毒的滴度）。
结论 成功制备了表达NAP和GFP的两种重组腺伴病毒rAAV-GFP和rAAV-NAP,为视网膜色素上皮疾病基因治疗奠定了基础。
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