| 目的 应用RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术沉默视网膜母细胞瘤细胞株SO－RB50中凋亡抑制因子survivin的表达，观察其干扰效果及对细胞的影响。方法 体外化学法合成针对人survivin基因的特异性siRNA和对survivin基因无沉默效果的阴性对照siRNA,利用转染试剂分别将siRNA 转入SO-RB50细胞株,通过半定量RT-PCR和Western Blot检测其对SO－RB50细胞中survivin基因和蛋白表达的抑制作用，MTT法检测不同浓度siRNA对细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率和细胞周期改变，荧光显微镜下观察细胞凋亡形态。结果 survivin特异性siRNA转染细胞24h后survivin mRNA和蛋白表达水平明显下调, 对照组中survivin mRNA和蛋白表达水平无明显改变。MTT结果显示survivin特异性siRNA浓度为35、70、100nmol/L时均对SO－RB50细胞增殖具有抑制作用，且具有剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪检测发现survivin特异性siRNA组出现凋亡亚二倍体峰，细胞被阻滞于G0/G1期，G2/M期细胞比例减少，S期细胞未见明显变化，荧光显微镜下见部分细胞出现染色质浓缩和凋亡小体等典型的凋亡形态学变化。结论 针对survivin的RNA干扰技术可有效地下调SO-RB50细胞中survivin基因表达，进而抑制SO－RB50细胞增殖和诱导其凋亡,为视网膜母细胞瘤的基因治疗提供了重要的途径。
|
网友评论：（只显示最新10条。评论内容只代表网友观点，与本站立场无关！）