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大鼠泪腺上皮细胞的体外培养与鉴定         
大鼠泪腺上皮细胞的体外培养与鉴定
作者:姚小磊 文章来源:湖南中医药大学,长沙市韶山中路113号 点击数:1025 更新时间:2008/1/12
大鼠泪腺上皮细胞的体外培养与鉴定
姚小磊,王方,彭清华
湖南中医药大学,湖南 长沙 410007
目的:目前已经有人、兔两种哺乳类动物泪腺上皮体外培养的报道,但是未见大鼠泪腺上皮细胞体外培养在国内的公开报道。目前,针对于泪腺上皮细胞的研究越来越多,且多与干眼症有关,因此大鼠泪腺上皮细胞的体外培养将给予研究较方便的实验材料。本实验旨在探讨大鼠泪腺上皮细胞原代体外培养、鉴定、冻存和复苏的方法。
方法:应用混合消化液培养法对Wister和SD两种大鼠泪腺上皮细胞进行体外原代培养,应用免疫组织化学染色方法对培养有第2代上皮细胞进行Pankeratin蛋白染色,以进行鉴定,取第2、4代细胞进行冻存,1个月后取出复苏。
结果:单纯胰酶消化较难使细胞贴壁,因此多聚赖氨酸包被培养瓶是比较重要的一步,多聚赖氨酸包被后,混合消化液培养法可获得较纯的泪腺上皮细胞,所获取的泪腺上皮为贴壁生长,未能形成生理状态下泪腺的囊腔结构,培养的泪腺上皮免疫组化染色Pan-keratin蛋白染色阳性。经冻存和复苏,细胞保持良好活性。
结论:混合消化液培养法联合多聚赖氨酸包被可获得较纯的泪腺上皮细胞,但不能保持其泪腺束腔结构。
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