目的 本实验拟通过建立大鼠视神经中度不全损伤动物模型后,研究玻璃体腔内注射外源性CNTF对视神经中度不全损伤的视神经节细胞的保护作用,由此本实验可为 临床治疗视神经损伤提供参考。
方法 1、动物模型制作:每只大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠30—50mg/kg麻醉后,于显微镜下剪开 外眦角,分离结膜组织及球后组织暴露ON,用无创血管夹于球后5mm处钳夹10秒钟造成ON中度损伤,免损伤眼动脉。术后涂抗菌素眼膏,观察大鼠眼底血供情况,无缺血者纳入实验。2、实验动物及分组:成年健康SD大鼠56只,,随机分为CNTF实验组和对照组各28只。实验组伤后在即时,7d、14d、28d时分别向玻璃体内注射CNTF溶液2μl(1μg/1μl),对照组在每个注射时间点向玻璃体内注射2μl蒸馏水,在伤后7d、14d、28d、56d时每组随机抽取大鼠4只作GAP-43免疫组化检测和组织学观察,随机抽取3只作电镜观察。3、GAP-43免疫组织化学检测:观察CNTF对视神经损伤远端GAP-43表达的影响,用图像自动分析系统分析检测结果。4、HE染色光镜观察:用图自动分析系统分析,光镜观察的结果,计算RGCs总数。5、电镜观察:按常规方法制作电子显微镜样品,观察RGCs超微结构改变。
结果 1、大鼠视神经中度损伤后,实验组RGCs密度大于对照组视网膜RGCs密度两组织间差异有统计学意义。2、大鼠视神经中度损伤后实验组损伤远端GAP-43阳性表达强于对照组两组间差异有统计学意义。3、电镜下观察,大鼠视神经中度损伤后实验组,从细胞形态上好于对照组。
结论 玻璃体腔内注射外源性CNTF对视神经损伤大鼠RGCs具有保护作用。 |