目的 本研究旨在探讨体外过表达Neurod1在诱导小鼠多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSc)向视网膜神经元细胞方向分化中的作用。
方法 将小鼠iPSc经过5种诱导方案进行诱导：逆转录病毒转染Neurod1组，逆转录病毒转染Neurod1+RA+Taurine组，RA+Taurine组，腺病毒转染Neurod1+CRX组，空白对照组。将诱导后第6、8、10、12、14、16天后的细胞行细胞免疫荧光和RT-PCR检测视网膜神经元特异性标记物。
结果 1..经过逆转录病毒过表达Neurod1后的小鼠iPSc呈现向神经细胞分化的形态，且增殖速度减慢，而在空白对照组细胞的分化形态不明显，增殖速度明显快于实验组。2. 经过逆转录病毒体外过表达Neurod1诱导后的小鼠iPSc表达视网膜神经节细胞(retinal ganlion cells, RGCs)相关蛋白如：MAP-2、Syn(Synaptopsin)、Islet-1、Math5、Brn3b、Thy1.2和神经胶质细胞相关蛋白GFAP。RT-PCR的检测也证实了诱导后第10天细胞开始表达Thy1.2，且随着时间的增长而增强。3. 过表达Neurod1结合添加RA+Taurine诱导后的细胞可以明显增加神经丝相关蛋白NF200的表达，而单独添加RA+Taurine并没有检测到视网膜神经元细胞的相关蛋白的表达。4. 通过腺病毒载体转染Neurod1和CRX诱导后的小鼠iPSc未能检测到视网膜相关蛋白的表达。
结论 1. Neurod1基因结合与细胞因子联合调控可以靶向诱导小鼠iPSc向视网膜神经节样细胞方向分化。2. 通过逆转录病毒转染Neurod1组能更为有效的诱导小鼠iPSc向RGC样细胞分化，而RA+Taurine组、腺 病 毒 转 染 Neurod1+CRX组和空白组不能诱导iPSc向RGC样细胞方向分化。3. RA和Taurine能够增强Neurod1对小鼠iPSc向神经细胞方向分化的作用，单独的添加RA和Taurine因子的诱导方案并不能诱导iPSc向视网膜神经节样细胞方向分化。4. 通过腺病毒载体过表达Neurod1和/或CRX后的小鼠iPSc未能向RGC样细胞和感光细胞方向分化。 | 
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