目的 探讨兔角膜缘干细胞体外培养和鉴定的方法，比较原代与传代细胞的生物学特性的变化，以选择最佳细胞制备角膜上皮膜片。
方法 组织块培养法体外培养兔角膜缘干细胞，通过光镜观察和HE染色对角膜缘干细胞原代和传代后细胞进行形态学的比较；用细胞免疫荧光技术检测角膜缘干细胞CK3、ABCG2单克隆抗体的表达量，检测细胞单克隆抗体MUC5AC的表达，排除结膜上皮的污染；流式细胞技术对不同代数角膜缘干细胞进行ABCG2单克隆抗体的定量检测；MTT比色法测定不同代角膜缘干细胞的增值活性。
结果 倒置显微镜下可见48h后，有细胞从组织块边缘片状或个体迁移，贴壁生长，呈多边形，体积较小，72小时后细胞局部可见拉网样生长趋势，96小时时出现大片细胞，细胞呈现多边形或多角形，第7天时细胞几乎铺满整个培养板；随着传代代数的增加，细胞形态逐渐发生改变免疫荧光染色显示角膜缘干细胞CK3、ABCG2单克隆抗体 均表达阳性，随着传代次数增CK3表达增多，ABCG2表达减少；流式细胞检测显示随着传代次数增多，ABCG2表达量减少；MTT比色结果显示，传代后细胞增殖活性明显下降。
结论 组织块体外培养角膜缘干细胞方法能够很好的保持细胞的原有的形态，但是随着传代次数的增多角膜缘干细胞在形态学，蛋白表达量及增殖活性上均不如原代细胞，因此应选择原代细胞制备组织工程角膜缘干细胞膜片。 | 
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