目的 在前期研究基础上，探讨吡非尼酮体外抑制人晶状体上皮细胞（HLECs）的作用和机制，为吡非尼酮应用于防治后囊膜混浊提供科学依据。
方法 传代培养永生化HLECS（SRA01/04），采用MTT法检测不同浓度吡非尼酮作用不同时间（0、4、12、24、48、72h）后HLECs的吸光度变化，确定吡非尼酮的起始作用浓度、最适作用浓度以及最适作用时间；采用划痕法检测不同浓度吡非尼酮作用下HLECs迁移能力的变化；采用台盼蓝法检测作用浓度范围内的吡非尼酮对HLECs是否有细胞毒性；应用Realtime RT-PCR法检测吡非尼酮作用后TGFβs及SMADs、Ｉ型胶原、基质金属蛋白酶（MMPs）基因表达的变化；通过免疫荧光法对吡非尼酮作用后TGFβs、SMADs、FN蛋白表达进行定位观察；免疫印迹法检测吡非尼酮作用后TGFβs、SMADs、FN蛋白表达的变化；明胶酶谱法检测吡非尼酮作用后HLECs分泌MMPs的变化，探讨吡非尼酮抑制体外HLECs增殖的可能机制。
结果 ①在0~1mg/ml的作用范围内，吡非尼酮作用于HLECs不同时间后，细胞形态没有明显改变，1mg/ml吡非尼酮作用24hr后细胞密度下降；②MTT法检测表明当吡非尼酮浓度达到0.3mg/ml以上、作用时间24hr后，细胞增殖受到抑制；再次通过MTT法检测并细分作用浓度（0.2、0.25、0.3、0.4、0.5、0.6mg/ml）确定吡非尼酮抑制HLECs增殖的起始作用浓度为0.25mg/ml，最适作用浓度为0.5mg/ml，最适作用时间为24hr；③划痕法发现不同浓度（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml）吡非尼酮作用24hr后对HLECs迁移能力受到抑制，随作用浓度增加，抑制作用愈明显；④台盼蓝法测得不同浓度（0.15、0.2、0.3、0.4、0.5、1mg/ml）吡非尼酮作用24hr后HLECs的活细胞率和对照组比较均无统计学差异，未观察到药物的毒性作用；⑤免疫荧光法检测HLECs中TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、SMAD3、SMAD4、FN蛋白主要在胞浆中表达；⑥Realtime RT-PCR检测吡非尼酮作用24hr后，TGFβ1、β2、β3及其下游因子SMAD3、4、Ｉ型胶原、MMP2 mRNA表达均减少；⑦免疫印迹法提示吡非尼酮作用24hr后，TGFβ2、3蛋白、SMAD3、4蛋白和FN蛋白表达均受到抑制；⑧明胶酶谱法提示吡非尼酮作用24hr后HLECs分泌MMP2和MMP9明显减少。
结论 吡非尼酮对体外培养HLECs的迁移和增殖有明显抑制作用且呈浓度依赖关系，其起始作用浓度和最适作用浓度分别为0.25 mg/ml和0.5mg/ml，最适作用时间为24hr；在作用浓度范围（0～1mg/ml）内，吡非尼酮对体外培养HLECs增殖的抑制作用和吡非尼酮的细胞毒性无关。吡非尼酮抑制体外培养HLECs增殖的机制可能是：通过抑制HLECs中TGFβs基因和蛋白的表达，从而抑制TGFβs下游通路（SMADs通路），影响Ｉ型胶原等的合成，减少MMPs的分泌；这些生长因子、胶原表达的减少可能是体外HLECs增殖和迁移能力受抑制的原因。