目的 探讨胰岛素受体缺陷的情况下,人眼小梁细胞内质网应激、Sigma-R、细胞凋亡等变化,以及给予Sigma-R激动剂对胰岛素受体缺陷的人小梁细胞的保护作用。
方法 选择两条针对胰岛素受体的干扰序列(Target-1、Target2),用带有增强型绿色荧光蛋白的慢病毒包装后感染体外培养的人小梁细胞,48小时检测并比较Target-1、Target2的干扰效率。将小梁细胞随机分为5组,即Target-1干扰组、Target2干扰组、空质粒干扰组、空白对照组、Sigma-R激动剂+Target-1干扰组,用realtime-PCR和Western blotting分别检测胰岛素受体、Sigma-R的表达情况。应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。用抗原抗体反应检测内质网应激相关蛋白GRP78、GADD153的表达情况。
结果 人小梁细胞胰岛素受体干扰后,流式细胞仪检测细胞凋亡增加。Target-1干扰组、Target2干扰组胰岛素受体基因序列及蛋白表达均降低(P<0.05),空质粒干扰组与对照组胰岛素受体表达无明显变化。Sigma-R在Target-1干扰组、Target2干扰组表达量增加(P<0.05),空质粒干扰组与对照组胰岛素受体表达无明显变化。抗原抗体反应检测内质网应激相关蛋白GRP78、GADD153的表达在Target-1干扰组、Target2干扰组均增加,空质粒干扰组与对照组胰岛素受体表达无明显变化。Sigma-R激动剂+Target-1干扰组流式细胞仪检测细胞凋亡较Target-1干扰组减少(P<0.05)。
结论 胰岛素受体缺陷的人眼小梁细胞Sigma-R表达量增加,内质网应激相关蛋白表达量增加,细胞凋亡明显。给予Sigma-R激动剂可以减轻因胰岛素受体缺陷而导致的细胞凋亡。 |