目的 本研究应用组织穿透力强、光漂白和光毒性小的双光子显微镜，以飞秒激光为光源，采用双光子荧光成像技术和二次谐波成像技术，利用生物体的自发荧光和组织的特殊结构，未使用任何染色剂和荧光标记探针，对小鼠的虹膜和角膜缘血管进行成像，为研究虹膜和角膜疾病提供方法和手段。
方法 主要仪器为德国Zeiss公司的LSM 780 NLO双光子激光扫描显微镜，美国相干公司的飞秒脉冲激光器。显微镜设置为：物镜为共聚焦专用20X浸入式水镜（NA 1.0），飞秒激光波长为960nm。C57BL/6N小鼠麻醉、固定后，暴露眼球，置于显微镜载物台上，用快速CCD获取时间序列血流图像，利用Zeiss Axiovision图像分析软件进行处理、分析。 
结果 用960nm波长的飞秒激光激发，用快速CCD获取时间序列图像，得到了虹膜血流、角膜缘部位血流、频死动物的虹膜血流图像。
结论 采用双光子激光显微镜，利用荧光成像技术和二次谐波成像技术，不使用任何染色剂和荧光标记探针，在活体体内可以清晰呈现虹膜和角膜缘部位的血流情况，有助于对虹膜炎症、虹膜新生血管、角膜炎症时炎症细胞如何从血管游出，向炎症部位以及角膜新生血管等疾病进行深入研究。