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光控制ChR2基因工程化的视皮层神经元活动研究           ★★★
光控制ChR2基因工程化的视皮层神经元活动研究
作者:王浩 文章来源:第三军医大学附属西南医院 点击数:264 更新时间:2012/9/13
目的  RCS大鼠视皮层神经元转染ChR2基因,采用波长为480nm蓝光控制视皮层神经元活动,为基于光基因技术的视皮层视觉假体提供实验和理论依据。
方法
  离体培养大鼠视皮层神经元,培养第7天用AAV2-CMV-ChR2-Venous病毒转染神经元,3天后采用全细胞膜片钳记录被转染神经元对480nm蓝光的电生理反应;在体向RCS大鼠视皮层注射该病毒,一月后去除大鼠视皮层部位的颅骨和硬脑膜,用光纤引导480nm蓝光以0.5Hz照射视皮层表面,用插于视皮层内的金属电极记录视皮层对光照的脑电反应,再根据光照刺激周期,对脑电进行叠加平均,获得光照诱发的脑电活动。
结果
  转染ChR2基因的培养神经元可对蓝光产生电生理反应,光照时可见细胞存在稳定内向电流(图1);光照ChR2基因转染的视皮层可诱发视皮层电活动,光照时可见皮层神经元集体放电活动(图2)。
结论
  采用基于ChR2的光基因技术可以离体及在体控制视皮层神经元活动,为开发基于光基因技术的视皮层视觉假体建立了实验和理论基础。
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