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| 抗血管生成作用的VEGFxxxb家族在视网膜色素上皮细胞中的表达 |
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作者：范思均 文章来源：解放军总医院 点击数：257 更新时间：2012/9/13 
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CNV是渗出型AMD致盲的根本原因。缺氧在渗出型AMD相关的CNV形成中起着重要作用。缺氧可显著增加RPE细胞分泌VEGF-A从而促进CNV生成。近年来研究表明，VEGF-A依选择性剪接方式的不同，可形成具有促血管生成作用的VEGFxxx家族和具有抗血管生成作用的VEGFxxxb家族。本文在mRNA和蛋白水平检测模拟缺氧状态下ARPE-19细胞中VEGFxxxb的表达，旨在观察VEGFxxxb在常氧和缺氧ARPE-19细胞中的表达变化，为探讨VEGFxxxb在CNV形成过程中的作用提供理论依据。
本文以人RPE细胞系ARPE-19细胞为研究对象，化学诱导剂氯化钴模拟其缺氧状态，分别于不同时间点收获细胞或上清液，应用RT-PCR检测VEGFxxx和VEGFxxxb mRNA的表达，Western blot检测总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白表达，ELISA检测细胞上清中总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白含量。
ARPE-19细胞在常氧及诱导缺氧后，均可检测到VEGFxxx家族和VEGFxxxb家族的mRNA表达。缺氧后VEGFxxx mRNA的表达增加，而VEGFxxxb mRNA的表达则减少。Western blot检测到VEGFxxxb家族蛋白，并显示出尤以VEGF165b表达最强。细胞缺氧后，总VEGF-A蛋白的表达有逐渐增加趋势，而VEGF165b则表达量逐渐减少，至缺氧12 h后显著减少。细胞上清中VEGFxxxb蛋白含量由常氧时（166.82 ± 2.55）pg/ml下降至缺氧24 h（125.35 ± 2.10）pg/ml，而总VEGF-A蛋白则由（294.27 ± 11.97）pg/ml上升至（582.26 ± 12.98）pg/ml。VEGFxxxb蛋白含量占总VEGF-A蛋白含量的比例随缺氧时间的延长，由常氧条件下的（56.71±1.02）%，下降至缺氧24 h的（21.53±0.08）%。
ARPE-19细胞常氧时VEGF165 mRNA和VEGF165b mRNA的表达水平相当，缺氧后VEGF165 mRNA的表达水平增加而VEGF165b mRNA的表达水平降低。ARPE-19细胞内VEGFxxxb蛋白表达以VEGF165b表达最强。常氧时总VEGF-A蛋白以VEGFxxxb占主导，缺氧后VEGFxxxb占总VEGF-A比例下降。 |
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| 会议投稿录入：毛进 责任编辑：毛进 |
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